Известно, что пирин тесно взаимодействует с внеклеточными и внутриклеточными факторами, такими как β2-адренергические рецепторы (класс TLRs), белками группы каспаз, NALP и другими белками, входящими в состав инфламмасом и участвующими в синтезе интерлейкина-1β, являющегося основным инициатором воспаления при ПБ [11,12]. Активность пирина отражается на активности этих структур, в частности, происходит интернализация или экстернализация TLRs с изменением их чувствительности к адренергическим агентам. 

Доказано, что механизмы воспаления включают участие всех типов иммунокомпетентных клеток, кооперацию системы макрофаг-лимфоцит и модулирующую роль симпато-адреналовой системы. Регулирующая функция последней осуществляется  через систему адренергических рецепторов, степень сенситизации которых  к адреномиметическим агентам имеет очень специфический характер при ряде заболеваний, включая ПБ, бронхиальную астму, аутоиммунные заболевания соединительной ткани [4].  

После открытия гена ПБ стал интересным поиск взаимосвязи и взаимодействия таких,  казалось бы, не связанных друг с другом, но параллельно вовлеченных в патогенез звеньев, как пирин и иммунная система.

Существует множество методов, определяющих степень сенситизации β2-адренергических рецепторов, к числу которых принадлежит описанный нами в более ранних работах метод инкубации Т-лимфоцитов с растворами адренергического агента различной молярности и последующей постановкой опыта Е-розеткообразования [1,4,6]. 

Целью настоящего исследования служило изучение влияния аллельного состояния гена ПБ на уровень Т-лимфоцитов периферической крови детей, страдающих ПБ, а также на  адренергическую чувствительность Т-лимфоцитов к селективному b2-адреномиметику – сальбутамолу.

Материалом исследования служила кровь 74 детей (в возрасте до 16 лет), поступивших на обследование и лечение в РДКБ с предварительным диагнозом периодической болезни. Диагноз ставился с  использованием  «Протокола обследования больного с подозрением на ПБ», болезнь классифицировалась по В.А.Аствацатрян и  Е.Х.Торосян [2]. 

В дальнейщем все больные переведены на диспансерное наблюдение и находились на регулярной колхицинотерапии.  

Контрольную группу составили 13 практически здоровых детей.

Методы исследования включали полное клинико-лабораторное обследование больного в приступе, межприступном периоде и на фоне колхицинотерапии с определением уровня Т-лимфоцитов и адренергической чувствительности к адреномиметику во всех фазах заболевания и на фоне лечения. 

В качестве адреномиметика использовали салбутамол в концентрациях 10-5М и 10-9М. 

Мононуклеарные клетки (МНК) получали центрифугированием гепаринизированной крови детей в градиенте плотности фикол-верографин.

Для оценки влияния b2-адреномиметика на Е-розеткообразование лимфоциты в количестве 2•106 кл/мл инкубировали с испытуемым препаратом 15 минут, отмывали и ставили реакцию спонтанного розеткообразования. В качестве контроля к МНК добавляли эквивалентное количество среды 199. Для количественной оценки Т-лимфоцитов использовался тест спонтанного розеткообразования с эритроцитами барана (Е-РОК) по M.Jondal et all [8]. Результаты исследований были обработаны методами вариационной статистики [3], достоверность разницы средних показателей определена по t-критерию Стьюдента. 

Результаты исследований

Для оценки уровня Т-лимфоцитов в зависимости от аллельного состояния гена MEFV, больные были разделены на подгруппы в соответствии с обнаруженными мутациями MEFV на гомозигот и гетерозигот. Как показали результаты исследований, уровень Т-клеток в приступе болезни не отличается в подгруппах (р>0,05) как и по сравнению с контролем (р>0,05).  

Уровень Т-лимфоцитов у гомо- и гетерозигот в межприступном периоде не отличался от такового в периоде приступа и показателей здоровых детей (контроль).    

Межприступный период не сопровождается изменениями количества Т-лимфоцитов в сравнении с периодом приступа и контрольными показателями. На фоне колхицинотерапии происходит достоверное снижение Т-лимфоцитов в сравнении с показателями приступа (р<0,05) и контроля (р<0,05) как в группе гомозигот, так и гетерозигот (таблица 1). Колхицинотерапия у гетерозигот приводит к выраженной иммуносупрессии как в сравнении с гомозиготами, так и контрольными показателями (р<0,05). 

Таблица 1  Взаимосвязь между аллельным состоянием MEFV и  уровнем Т-лимфоцитов периферической крови детей с ПБ в разные фазы болезни

Примечание: *- достоверная разница внутри подгруппы

                   ** - достоверная разница между группами

                   *** - достоверная разница с контролем

В группе больных старше 6,5 лет был проведен сравнительный анализ влияния аллельного состояния гена MEFV на b2-адренергическую чувствительность Т-лимфоцитов (таблица 2). Оказалось, что салбутамол в обеих испытуемых дозах влиял на Е-розеткообразование Т-лимфоцитов в подгруппе гомозигот как в приступе болезни, так и межприступном периоде, а в дозе 10-5М на фоне колхицинотерапии (р<0,05). В подгруппе гетерозигот влияния салбутамола на Е-розеткообразование отсутствовало (р>0,05). 

Таблица 2  Сравнительный анализ влияния аллельного состояния MEFV на адренергическую чувствительность Т-лимфоцитов к сальбутамолу

Примечание: *    - достоверная разница внутри подгруппы

                   **    - достоверная разница между группами

                   *** - достоверная разница с контролем

Заключение

Полученные данные свидетельствуют о взаимосвязи клеточного звена иммунитета, а также его адренергической части, с мутациями MEFV в патогенезе периодической болезни, о влиянии аллельного состояния MEFV на функцию адренергических рецепторов Т-лимфоцитов.

Литература 

1. Аствацатрян В.А., Кцоян Л.А., Петросян Р.А., Клинические параллели нейро-иммунных взаимоотношений при периодической болезни у детей//Тезисы Х1 научно-практической конференции детских врачей г. Еревана, 17-18 октября 1995г. С. 34. 
2. Аствацатрян В.А., Торосян Е.Х. Периодическая болезнь у детей//Ереван, «Айастан», 1989,-249с.
3. Бессмертный Б.С., Математическая статистика в клинической, профилактической и экспериментальной медицине, Москва, 1967.
4. Петросян Р.А. Взаимосвязь состояния 2-адренорецепторов и содержания Т-лимфоцитов при периодической болезни у детей//Дисс. Канд. Ереван 1997, 159с.
5. Allen J.N., Herzyk D.J., Wewers M.D., Colchicine has opposite effects on Il-1b anf TNF alpha production//Current Opinion in Pharmacology, Vol.3, Issue 4, Augusts 2003, p 204.
6. Astvatzatryan V.A., Ktzoyan L.A., Petrosyan R.A. T – lymphocyte adrenoceptor succeptibility to salbutamol and the level of periferial T – lymphocytes in children with FMF. Familial  Mediterranean Fever. Second  International conference. 3 – 7 may, 2000, Anthalya, Turkey, р. 78.
7. Garcia-Marcos M., Perez-Andres E., Tandel S.,et all. Coupling of two pools of P2X7 receptors to distinct intracellular signaling pathways in rat submandibular gland//J. Lipid Res., April 1, 2006; 47(4): 705 - 714. 
8. Jondal M., Holm G., Wigzell H. Surface markers on human T- and B-lymphocytes.1.A large population of lymphocytes forming nonimmune rоssettese with sheep red blood cells//J. Exp.Med., 1972., No.136.,P207-215.
9. Inohara Naohiro, Takeyoshi Koseki, Lin Jungmei, del Peso Luis, Lucas Peter C at all An induced Proximity model for NF-kb Activation in the Nod1/Rick and RIP Signaling Pathways// J.Biol.Chem., 2000, Vol.275, Issue 36, September 8, 27823-27831.
10. O’Connor W, Jonathan Jr., Harton A., Zhu Xinsheng, et all. Cutting Edge: CIASI/Cryopyrin/PYPAF1/NALP3/CATERPILLER 1.1 is an inducible Inflammatory Mediator with NF- Supressive properties//The Journal of Immunology, 2003, 171:6329-6333.
11. Reiter E. and Lefkowitz Robert.J GRKs and -arestins: roles in receptor silencing, trafficking and signaling//Trends in Endocrinology and Metabilism, 2006, Vol.17, No4, p.159-165
12. Wittkowski H., Kallinich T., Keitzer R. et all D. The Damage Associated Molecular Pattern (DAMP) Molecules and TLR-4 ligands MRP8/14 in the pathogenesis of Familial Mediaterranean Fever//Clinical and Experimantal Rheumatology, The Fifth International Congress on Familial Mediterranean Fever And Systemic Autoinflammatoy Diseases, Rome, April 4-8, 26: 2008, p.188.