Иммуноморфологические сдвиги сосудистого барьера в небных миндалинах при хроническом тонзиллите

Ключевые слова: небные миндалины, хронический тонзиллит, посткапиллярные венулы, эндотелий, полиморфноядерный лейкоцит, катионные белки

Небные миндалины являются составной частью иммунокомпетентной системы. Их роль не ограничивается иммунологическим надзором за внутренней средой организма, они обеспечивают получение организмом информации об антигенах, находящихся в ротоглотке. Будучи лимфоэ­пителиальными органами, они являются составной частью лимфаденоидного глоточного кольца, играют роль своеобразного регионального источ­ника эффекторных клеток памяти, поставляемых в контролируемые слизистые оболочки [2].

Учитывая все вышесказанное, особое значение приобретают проблемы этиопатогенеза тонзил­лярной болезни и хронического тонзиллита. 

В развитии патологического процесса важное значение имеет бактерицидная система фагоцитов миндалин, при непосредственном участии полиморфноядерных лейкоцитов (ПЯЛ). Анти­микробная функция ПЯЛ осуществляется двумя основными механизмами: выбросом (секрецией) бактерицидных веществ, содер­жащихся в гранулах, и фагоцитозом микробов с последующим их уничтожением и перевари­ванием. Выделяют кислородзависимые и кисло­род­независимые бактерицидные системы ПЯЛ. К кислородзави­симым системам относятся катион­ные белки (КБ), которые лишены фермен­тативной активности, а их бактерицидное действие обусловлено нарушением структуры и функции микробной клетки [3].

Степень подавления жизнеспособности микроба зависит от ряда факторов: вида микроба, его патогенных свойств, концентрации катионных белков, величины pH, t. Бактерицидное действие катионных белков повышается при снижении pH. Максимальный бактерицидный эффект отме­чается в кислых средах, содержащих молочную кислоту, которая в больших количествах образуется при  гликолизе.

Помимо того, что КБ обладают широким спектром антимикробной активности, они имеют свойства медиатора воспаления, фактора прони­цаемости, стимулятора фагоцитоза, модификатора дыхательных и ферментативных процессов в клетке. Лизосомально-катионные белки влияют на динамику дегрануляции ПЯЛ. Эти белки при низких концентрациях (10мг/мл) стабилизируют гранулы ПЯЛ, а в больших концентрациях (50-100мг/л) вызывают выраженную дегрануляцию.

Таким образом, в условиях физиологической гибели ПЯЛ в тканях, образующиеся при их распаде КБ, способствуют стабилизации вновь приходящих ПЯЛ, а в очаге воспаления, где КБ образуются в большом количестве, они опре­деляют быструю дегрануляцию приходящих нейтрофилов. Это свойство КБ представляется как один из ауторегулирующих механизмов ПЯЛ. 

При декомпенсированном хроническом тон­зиллите за барьерные функции на пути распрост­ранения инфекции ответственны посткапиллярные венулы (ПВ) с высоким эндотелием межфолли­кулярной ткани (МФЛТ) [1]. Как свидетельствуют литературные данные, последние принимают также активное участие в процессе рециркуляции лимфоцитов [4]. 

Материал и методы 

Материалом для исследования служили небные миндалины 24 больных с декомпенсированным хроническим тонзиллитом. Отпечатки с поверх­ности миндалин готовились непосредственно после тонзиллэктомии. Кусочки небных миндалин фикси­ровались в 10% растворе нейтрального формалина и заливались в парафин. Отпечатки окрашивались прочным зеленым по Пигаревскому. Парафиновые срезы окрашивались гемотоксилином и эозином, азаном по Гейденгайну. При микроскопии небных миндалин проводился количественный подсчет ПВ в 10 полях зрения каждой миндалины (об. 10, ок.10). Контролем служили небные миндалины, взятые у 10 трупов практически здоровых людей, погибших от травмы. 

Для суммарного цитохимического выявления КБ, определения состояния бактерий в очаге воспаления, а также количественной и качествен­ной оценки процесса фагоцитоза, предложен лизосомально-катионный тест, который основан на использовании анилинового красителя – прочного зеленого, избирательно окрашивающего КБ при  pH – 8,2.

Для выявления клеточных ядер и микробов необходима докраска препаратов ядерными краси­телями. Для этой цели нами применялся азур ,,А’’.

Внутриклеточная активность КБ – важный показатель функционального состояния фагоцитов, и по степени интенсивности окраски клеток мы судили о содержании в них катионных лизосо­мальных гранул. 

Результаты и обсуждение

По степени интенсивности окрашивания все нейтрофильные гранулоциты были разделены на 3 группы. 

В I группе содержание  КБ было 7,44±0,14, во II–4,6±0,39 и в III – 2,37±0,59. (подсчет ведется на 100 нейтрофилов). Активность КБ мы оце­нивали по методуу C.Astaldi и L.Vorga (1985) как средний цитохимический коэффициент (СЦК). 

Исходя из активности КБ, исследуемый материал распределен на три группы. Наибольшая активность КБ наблюдалась в первой, наименьшая – в третьей группе. 

В отпечатках раздельно определялись грануло­циты с фагоцитированными живыми и мертвыми микробами (рис.1). Мертвые микробы, обработан­ные КБ, окрашивались в зеленый цвет, тогда как живые окрашивались азуром в синий цвет. Результаты выражаются в условных единицах от 1 до 4, которые отражают процент гранулоцитов с фагоцитированными микробами в одном поле 

 Рис. 1. Жизнеспособная микрофлора в цитоплазме лейкоцита и начальная стадия гибели ПЯЛ. Окр. прочным зеленым по Пигаревскому, х1600

зрения микроскопа: 4–75,0, 50–75,0, 25–50,0%, 1–менее 25,0%. Полученные при просмотре 10 полей зрения условные единицы суммируются и исполь­зуются для определения среднего цитохими­чeского коэффициента бактерицидной активности КБ ПЯЛ (табл. 1).

Таблица 1 

Результаты определения бактерицидной активности КБ при хроническом тонзиллите

Из таблицы следует, что в данном случае также наивысшая бактерицидная активность наблю­далась в первой, наименьшая – в третьей группе. По тому же принципу определялся средний цито­химический коэффициент внеклеточной бакте­рицидной активности КБ. При этом данные также коррелируют с предыдущими.

При низких показателях лизосомально-катион­ного теста ПЯЛ превращаются в ,,хранилище’’ жизнеспособных микробов, сохранивших свойст­венную им ультраструктуру. 

Таким образом, лизосомально-катионный тест, используемый для выявления бактерицидной активности небных миндалин, позволяет судить о состоянии антимикробной защитной функции миндалин, о ее характере и течении воспали­тельного процесса. 

Морфогистологическое исследование небных миндалин выявило, что эпителий крипт был диф­фузно инфильтрирован лимфоидными элементами, преимущественно лимфоцитами и плазмати­ческими клетками. Последние образовывали периваскулярные скопления в субэпителиальной соединительной и межфолликулярной лимфоидной ткани вокруг ПВ. Гиперплазированные лимфоид­ные фолликулы характеризовались четкими гра­ницами, светлыми центрами, богатыми лимфо­блас­тами, лимфоцитами, плазмоцитами, иногда макрофагами. Лимфоидные пояски вокруг фолли­кулов имели хорошо выраженную полулунную форму полумесяца и были обращены к просвету лакун. Иногда границы лимфоидных фолликулов были нечеткими, а лимфоциты инфильтрировали МФЛТ. 

В МФЛТ отмечалось наличие ПВ, в некоторых участках с высокими, гипертрофированными эндотелиоцитами, на поверхности которых тесно прилипали лимфоциты, ПЯЛ, микробы. Последние нередко выявлялись в фибриновых свертках, выстиляющих эндотелиальную поверхность, что является результатом сверхэндотелиальной коа­гуля­ции плазмы, или же непосредственно в цитоплазме эндотелиоцита. 

Из вышеизложенного следует, что ПВ обеспе­чивают фиксацию микробов на эндотелиальной поверхности и их удаление из сосудистого русла, таким образом являясь важным внутритон­зилляр­ным барьером на пути инфекции.

Структурные изменения со стороны ПВ, проявляющиеся в виде набухания эндотелиальных клеток, адгезии стрептококков на их поверхности и фагоцитоза, в том числе сужением, а местами и закупоркой просветов ПВ за счет пролиферации эндотелиальных клеток и тромбообразования, сви­детельствуют об их компенсаторном и приспособи­тельном характере. 

В результате подсчета общeго числа ПВ и ПВ с высоким эндотелием выявилось количественное увеличение этих структур в МФЛТ по сравнению с контрольной группой (табл. 2).

Таблица 2 

Среднее количество ПВ в МФЛТ небных миндалин при хроническом тонзиллите

В небных миндалинах с высокой реактивностью (наличие гиперпластических лимфоидных фолли­кулов с выраженными светлыми центрами, гипер­плазией МФЛТ с плазмоцитарной и макрофа­гальной инфильтрацией) отмечалось наибольшее количество функционально активных ПВ с высоким эндотелием (общее число–48,4%). Здесь отме­чался наименьший показатель общего числа ПВ, поскольку реактивность небных миндалин высокая и гиперплазия ПВ, как терминального барьера на пути инфекции, не достигает максимального уровня. 

В небных миндалинах с низкой реактивностью (макроскопически атрофичные миндалины со склерозом соединительнотканной капсулы, атро­фич­ными лимфоидными фолликулами без светлых центров и полулунообразными скоплениями лимфоцитов, с периваскулярным и диффузным склерозом в МФЛТ при микроскопии), наоборот, отмечалось сравнительно низкое количество ПВ с высоким эндотелием (43,8%), тогда как их общее число наивысшее, что является важным морфо­логическим показателем интенсивности компен­саторных процессов в тканях миндалин при пер­систирующей внутритканевой инфекции.

Из табл. 2 следует, что в миндалинах со сред­ней реактивностью отмечается средний показа­тель общего числа ПВ по сравнению с первой и третьей группами.

 Рис.2. Гиперплазия ПВ в МФЛТ небных миндалин при хроническом тонзиллите.Окр. азановым методом по Гейденгайну, х400

Таким образом, результаты морфологических и морфометрических исследований ПВ выявили компенсаторные и приспособительные изменения со стороны их эндотелия, которые сопровож­даются увеличением их количества в МФЛТ (рис.2).

Результаты наших исследований показали, что существует обратно зависимая связь между пока­зателями интенсивности выработки катионных белков и гиперплазией ПВ в МФЛТ. При хрони­ческом тонзиллите ограниченная гиперплазия общего числа ПВ отмечается при относительно высокой реактивности миндалин, когда количество функционально активных венул с высоким эндо­телием в их составе максимальна. Для таких мин­далин характерна высокая интенсивность КБ в нейтрофильных гранулоцитах, их наивысшая бактерицидная активность и наименьшее опре­деление живых микробов в тканях миндалин. Гиперплазия ПВ достигает максимального уровня в миндалинах с относительно низкой реактив­ностью и характеризует полную декомпенсацию хронического тонзиллита.

ПВ, являясь полифункциональными структу­рами, обеспечивают элиминацию инфекции из просвета с помощю высокоспециализированного эндотелия путем адгезии стрептококков на их поверхности и фагоцитозом. Такая функция со стороны ПВ имеет важное значение для предот­вра­­щения пронокновения инфекции в общий кровоток.

Внедрение лизосомально-катионного теста в повседневную практику позволит изменить тактику лечебно-профилактических мероприятий.

Литература 

1. Амбарцумян С.В. Иммуноморфологическая характерис­тика посткапиллярных венул межфолликулярной ткани небных миндалин при хроническом тонзиллите. Дисс. канд. н. 2003.
2. Быкова В.П. Современный аспект проблемы тонзиллярной болезни, Арх. пат., 1996, 3, с. 23–30. 
3. Пигаревский В.Е. Лизосомально-катионный тест и перспективы его применения в патоморфологической и лабораторной диагностической практике, Арх. пат., 1978, 4, с. 74–80.
4. Zidan M., Iecker P., Pabst R. Differences in lymphocyte subsets in the wall of high endothelial venules and the lymphatics of human palatine tonsils, Scand. J. Immunol., 2000, 51(4), p.372–376.

Вопросы, ответы, комментарии